Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品描述
Stbl2是采用大腸桿菌JM109菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，適合于多種插入片段的化學(xué)轉(zhuǎn)化。具有以下特點(diǎn)：
① 更適于不穩(wěn)定插入片段（正向重復(fù)序列，逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等）的克??；
② 更適于克隆慢病毒載體、甲基化的基因組序列；
③ 利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提??；
④ 不存在lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。
本品使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)109cfu/μg。
本品基因型：F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 。
Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品組分
運(yùn)輸與保存方法
干冰運(yùn)輸。
Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞-80℃保存，pUC19質(zhì)粒-20℃保存。有效期半年。
Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)
1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2）整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件要求進(jìn)行。
3）為確保*高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。
4）為防止轉(zhuǎn)化不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，*低化實(shí)驗(yàn)可能遇到的風(fēng)險(xiǎn)。
Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞使用方法
1）取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
【注】：一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用，應(yīng)注意所用的DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
2）向100 μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置25min。
3）置于42℃水浴中熱激45 s，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冷卻2-3min，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管，否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
4）向離心管中加入900μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含***），混勻后置于30℃搖床振蕩培養(yǎng)90min（225rpm），目的是促使菌體復(fù)蘇。
【注】：當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化Control pUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃，225 rpm復(fù)蘇60min。
5）將上述復(fù)蘇的菌液于5000rpm離心1min，留取100μl左右上清輕輕混勻菌液并涂布到含相應(yīng)***的SOC培養(yǎng)基上。
6）將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
【注】：若轉(zhuǎn)化control pUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃培養(yǎng)過(guò)夜。
